目的 建立Sprague Dawley(SD)大鼠的正常膝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞原代培養(yǎng)方法及脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)誘導(dǎo)成纖維樣滑膜細(xì)胞( fibroblast-like synoviocytes,FLS) 炎癥模型。 

方法 選取80~120g SPF級(jí)幼年SD大鼠, 分離其滑膜組織,原代培養(yǎng)至第3代,用組織化學(xué)染色法和EdU法檢測(cè)FLS蛋白標(biāo)志物vimentin和增殖功能。 同時(shí),用滑膜組織作對(duì)照,檢測(cè)第3代至第8代原代培養(yǎng)FLS的特征蛋白表達(dá),篩選具有生理功能的高純度且可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的FLS細(xì)胞。 LPS誘導(dǎo)FLS炎癥后,檢測(cè)LPS制激FLS不同時(shí)間點(diǎn)的 IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白表達(dá),根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定LPS成功誘導(dǎo)FLS炎癥模型的時(shí)間點(diǎn)。檢測(cè)FLS被LPS誘導(dǎo)前后的細(xì)胞因子、增殖功能和特征蛋白的表達(dá),為分析FLS炎癥模型提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 

結(jié)果 采用0.2% I型膠原酶消化法,成功培養(yǎng)了FLS原代細(xì)胞。 經(jīng)檢測(cè)蛋白標(biāo)志物vimentin, 第3代FLS純度達(dá)98%以上。 通過(guò)FLS特征蛋白檢測(cè),篩選出具有生理功能且可用作后續(xù)實(shí)驗(yàn)的FLS為第3代至第7代原代細(xì)胞。 通過(guò)對(duì)LPS誘導(dǎo)后的FLS的細(xì)胞因子和特征蛋白分析,確定1μg/mL LPS誘導(dǎo)FLS細(xì)胞3h,能復(fù)制出FLS炎癥模型。